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生化檢驗(yàn)是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)重要的一部分，其特點(diǎn)是定量檢測(cè)。是否使用了先進(jìn)的儀器設(shè)備、合格的試劑、有資質(zhì)的人員就能做好生化項(xiàng)目檢驗(yàn)？多數(shù)情況下是肯定的，但實(shí)際工作中還會(huì)出現(xiàn)這樣那樣的失控，甚至不得其解。這需要我們多總結(jié)遇到的問(wèn)題，研究項(xiàng)目的原理，做工作中的有心人，才能不斷提高檢驗(yàn)水平。

一、標(biāo)本及時(shí)分離與測(cè)定

標(biāo)本的及時(shí)分離及測(cè)定是體現(xiàn)樣本真實(shí)結(jié)果的重要保證。利用NADH轉(zhuǎn)化為NAD 變化率來(lái)檢測(cè)其物質(zhì)含量的試驗(yàn)都或多或少受到血液存放時(shí)間的影響。原因是全血存放時(shí)間越長(zhǎng)，紅細(xì)胞利用血清中的糖進(jìn)行無(wú)氧酵解產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸使NADH轉(zhuǎn)化為NAD ，這樣使測(cè)定結(jié)果假性升高，如ALT、AST、BUN、CK、LDH、HBDH等。此外，由于糖酵解，血中GLU隨著存放時(shí)間的延長(zhǎng)約以5-7%/小時(shí)的速度降低。因此，一定要作好與臨床的溝通，對(duì)抽血和標(biāo)本運(yùn)送人員進(jìn)行培訓(xùn)；收到標(biāo)本后及時(shí)分離血清并檢測(cè)；也可將全自動(dòng)生化分析儀上的延遲時(shí)間設(shè)置大于60秒，這樣試劑在延遲期內(nèi)消除丙酮酸的干擾，可完全避免假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)。

二、抗凝劑的使用

    目前臨床上常用的抗凝劑有EDTA-2K、肝素、枸鹽酸鈉等，TBA和AFU不能用肝素抗凝劑，因?yàn)楦嗡貢?huì)使TBA和AFU試劑發(fā)生混濁，導(dǎo)致吸光度假性偏高，從而使檢測(cè)結(jié)果偏高。所以認(rèn)真參閱試劑說(shuō)明書(shū)，按照要求采集正確標(biāo)本。

三、儀器用水

合格的儀器用水是保證生化結(jié)果的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。測(cè)定離子類的項(xiàng)目：比如銅、鐵、鋅、鈣、鎂、磷，在使用過(guò)程中，儀器用水的質(zhì)量相當(dāng)重要，雖然現(xiàn)在一般醫(yī)院的生化儀都帶有制水系統(tǒng)，但制水系統(tǒng)基本都是制備去離子水，離子交換樹(shù)脂在使用一段時(shí)間后交換能力明顯下降，需要定期進(jìn)行更換，否則制備的水離子含量多，電導(dǎo)率偏高。使用含離子超標(biāo)的水沖洗儀器，直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。再如血氨、二氧化碳項(xiàng)目，如果水質(zhì)不好，儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高，則檢測(cè)該項(xiàng)目的結(jié)果也會(huì)受到嚴(yán)重的影響。如果血清中含有GLDH，而儀器用水存在氨時(shí)，可消耗NADH，使利用NADH的酶聯(lián)連續(xù)監(jiān)測(cè)法結(jié)果偏高。所以需要定期監(jiān)測(cè)水質(zhì)，當(dāng)儀器用水的電阻小于1．0M?時(shí)要及時(shí)更換離子交換樹(shù)脂或活性炭。 

四、交叉污染 

在使用全自動(dòng)生化分析儀的過(guò)程中，可能會(huì)遇到這樣的情況：?jiǎn)为?dú)做某個(gè)項(xiàng)目時(shí)結(jié)果沒(méi)有問(wèn)題，可是將它與某些項(xiàng)目組合在一起時(shí)，結(jié)果卻出現(xiàn)異常。這種現(xiàn)象首先就要考慮交叉污染。交叉污染是在生化分析儀中比較常見(jiàn)的現(xiàn)象，其中的原因是全自動(dòng)生化分析儀的清洗系統(tǒng)隨著儀器使用時(shí)間的累加，清洗效果逐漸下降，試劑交叉污染的程度增加所致。全自動(dòng)生化分析儀各試劑間的相互干擾影響到了檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，給檢驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)很大的偏差。只要我們找出其中的規(guī)律，就可以避免這種情況的發(fā)生。以下兩種情況較為多見(jiàn)：

（1） 生化分析儀清洗問(wèn)題造成的交叉污染

生化分析儀的交叉污染主要來(lái)源于：樣品針、試劑針、攪拌棒和比色杯。由于全自動(dòng)生化分析儀試劑針需要接觸各種試劑，一般難以徹底清洗干凈，所以容易造成分析項(xiàng)目的攜帶污染．而生化項(xiàng)目的測(cè)定往往僅需要幾微升樣本，試劑往往需要幾百微升，尤其在沒(méi)有自動(dòng)沖洗程序的流動(dòng)池式生化分析儀上，由于前帶現(xiàn)象的存在，如果前一個(gè)樣本為高值樣本，則接后的第一個(gè)低值標(biāo)本結(jié)果應(yīng)慎重報(bào)告。不僅沒(méi)有沖洗程序的生化分析儀器上有這種現(xiàn)象，就是具有自動(dòng)沖洗程序的全自動(dòng)生化分析儀也有交叉污染。另一個(gè)值得注意的問(wèn)題是許多生化儀器由于長(zhǎng)期頻繁的利用，加樣針和試劑針的注射器磨損加重、注射器的“特氟龍”吸頭不及時(shí)更換等原因，使吸樣針或試劑針密封層增大，產(chǎn)生泄漏現(xiàn)象也是造成樣本間及試劑間相互污染的一個(gè)重要原因。試劑吸樣或樣品吸樣不準(zhǔn)確，通常導(dǎo)致利用速率法測(cè)試的標(biāo)本系統(tǒng)偏低或偏高。速率法計(jì)算因子是由加樣體積和試劑體積參與確定的，如果加樣體積或加試劑體積不準(zhǔn)，導(dǎo)致真正速率計(jì)算因子和理論計(jì)算因子偏離，從而使檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。此外，還有攪拌棒涂層出現(xiàn)破損、比色杯磨損或沖洗泵故障等引起的結(jié)果偏差。為避免上述交叉污染出現(xiàn)，需按照要求定期進(jìn)行儀器維護(hù)保養(yǎng)，及時(shí)更換零部件，并定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。 

（2）檢驗(yàn)項(xiàng)目間的交叉污染

一個(gè)項(xiàng)目會(huì)影響緊隨其后項(xiàng)目的測(cè)試結(jié)果，造成這種影響的原因是前者試劑中含有后者試驗(yàn)的測(cè)定物質(zhì)而直接干擾其測(cè)試結(jié)果；或者前者試劑中含有改變后者試驗(yàn)反應(yīng)條件或影響其反應(yīng)進(jìn)程的物質(zhì)而間接干擾其測(cè)試結(jié)果。例如，在TP試劑中含有大量的CuSO4，如果將Cu放在TP項(xiàng)目的后面檢測(cè)，會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。P放在含有磷酸鹽的項(xiàng)目后面，TBA放在含有膽酸鹽的項(xiàng)目后面，如CH，都會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。GLU放在CK和CK—MB的項(xiàng)目后面可能會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。原因是CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）試劑中含有Glu成分，其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反應(yīng)過(guò)程，因此可能對(duì)Glu測(cè)定帶來(lái)干擾，尤其對(duì)Glu的HK法測(cè)定可能帶來(lái)嚴(yán)重干擾。此外，相鄰兩個(gè)項(xiàng)目的PH值相差太大或?qū)H要求嚴(yán)格的項(xiàng)目，也會(huì)對(duì)測(cè)定的結(jié)果產(chǎn)生影響，比如TP和Alb之間PH相差較大，會(huì)互相干擾，TBA放在Alb后面測(cè)定，會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏低。大多數(shù)酶反應(yīng)pH值在6.0-7.5之間；ALP、γ-GT、LDH須在堿性條件下適宜。解決此類交叉污染，需要了解項(xiàng)目試劑組成、反應(yīng)的原理、所需的條件，來(lái)調(diào)整合適的實(shí)驗(yàn)順序；在造成污染的項(xiàng)目和受污染的項(xiàng)目之間設(shè)置加強(qiáng)清洗。 

五、試劑使用

（1）正確設(shè)置參數(shù)

生化分析儀上通常有分析程序供用戶設(shè)定，包括樣品量、試劑量、波長(zhǎng)、分析方式和延遲時(shí)間、測(cè)試時(shí)間等。下面就延遲時(shí)間和加樣程序的設(shè)定來(lái)說(shuō)明如何正確使用分析參數(shù)。以肌酐苦味酸測(cè)定法為例，苦味酸在堿性條件下50秒前首先快速與如乙酰乙酸等快反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生紅色化合物，而在120秒后堿性苦味酸又能與慢反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生陽(yáng)性干擾，所以延遲時(shí)間好設(shè)定為50～6O秒之間，測(cè)定時(shí)間小于6O秒，這樣就充分消除了快反應(yīng)和慢反應(yīng)干擾，從而檢測(cè)到真正肌酐含量。此外，試劑說(shuō)明書(shū)中關(guān)于參數(shù)的設(shè)置是經(jīng)過(guò)廠家驗(yàn)證合理有效的，但仍需根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室條件、儀器狀態(tài)和樣本結(jié)果進(jìn)行綜合觀察，可以做適當(dāng)調(diào)整以達(dá)到適合本實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)要求。   

（2）校準(zhǔn)液的使用  

目前生產(chǎn)廠家提供的校準(zhǔn)液只適用于某一特定的分析系統(tǒng)，同一項(xiàng)目不同方法學(xué)的校準(zhǔn)液不能混用，比如膽紅素釩酸鹽法用重氮法的校準(zhǔn)液校準(zhǔn)，TBA循環(huán)酶法用比色法校準(zhǔn)液校準(zhǔn)等都會(huì)造成測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。甚至同一方法學(xué)，不同廠家的校準(zhǔn)品和試劑都會(huì)有所差異。所以建議選擇適合自已實(shí)驗(yàn)室的校準(zhǔn)品，與理論計(jì)算的factor值差異不大，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有明顯的影響因素，如有條件可進(jìn)行系統(tǒng)溯源。在實(shí)現(xiàn)溯源性目標(biāo)過(guò)程中，以患者新鮮標(biāo)本為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以方法學(xué)對(duì)比試驗(yàn)為驗(yàn)證手段。 

（3）開(kāi)瓶穩(wěn)定性

開(kāi)瓶穩(wěn)定性也是檢驗(yàn)試劑質(zhì)量是否過(guò)硬的一個(gè)指標(biāo)。目前就某些項(xiàng)目的方法學(xué)來(lái)講，還達(dá)不到人們所要求的試劑開(kāi)瓶后在儀器內(nèi)放很長(zhǎng)時(shí)間不需要定標(biāo)，比如ALP、TP、GSP等PH為堿性的試劑，開(kāi)瓶后試劑會(huì)吸收空氣中的二氧化碳，使試劑本身的PH值下降，如果長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)瓶不定標(biāo)或校準(zhǔn)，會(huì)使檢測(cè)結(jié)果發(fā)生偏離，有些實(shí)驗(yàn)室為了方便，很長(zhǎng)時(shí)間都不作校準(zhǔn)，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的不準(zhǔn)確。所以上機(jī)試劑量要根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本量來(lái)定，放置1～2天的用量即可，試劑瓶在儀器內(nèi)使用時(shí)間不要過(guò)長(zhǎng)，及時(shí)更換。根據(jù)試劑特性，及時(shí)對(duì)項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn)。   

（4）不同批號(hào)試劑相混

將不同批號(hào)的試劑混合在一起使用的現(xiàn)象在工作中經(jīng)常發(fā)生，但是由于不同批號(hào)的試劑生產(chǎn)時(shí)間不同，試劑中工具酶的活性會(huì)有差異，會(huì)發(fā)生水解的底物濃度隨時(shí)間長(zhǎng)短也會(huì)不同。因此混在一起使用而又不定標(biāo)，可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。還有如果有的試劑開(kāi)瓶時(shí)間太長(zhǎng)，空氣中的灰塵或細(xì)菌會(huì)進(jìn)入瓶中，由于有的試劑含有大量的蛋白質(zhì)和鹽，是細(xì)菌生長(zhǎng)的好條件，雖然有的試劑添加了防腐劑，但防腐劑的防腐也是有一定限度的，而且絕大多數(shù)廠家的試劑中是沒(méi)有防腐劑的。所以建議不同批號(hào)試劑不要混用，如果混用好重新定標(biāo)；多個(gè)試劑瓶剩余不同批號(hào)的試劑，可以留起來(lái)待一定數(shù)量后混在一起，然后重新定標(biāo)后使用。